| Diferencias entre el MethylDetector y el MethylCollector. |
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| • Methyl Detector™. Método por conversión de Bisulfito 1.- El DNA de interés es desnaturalizado por calor en el termociclador en presencia de bisulfito. 2.- Luego se baja la temperatura y se realiza la reacción de conversión por la que las citosinas no metiladas se sustituyen por uracilos. 3.- Las citosinas metiladas permanecen sin cambios. 4.- Se amplifica el DNA por PCR y se analiza por secuenciación o digestiones con enzimas de restricción. 5.- Se puede crear un perfil de la muestra comparando la secuencia de DNA tratado con el DNA sin tratar. El DNA eluido por la columna de purificación estará ya listo para la reacción de PCR. El kit incluye: Columnas para la desulfonación tras la reacción de conversión. Primers para el control positivo de PCR que pueden ser usados para medir si el proceso de conversión del bisulfito se ha realizado correctamente antes de la secuanciación del DNA. (Estos primers sólo anillan en DNA humano). • MethylCollector™: Kit para aislar de forma específica el DNA metilado - Extracción de DNA metilado de células y muestras de tejidos. - Óptima para analizar los niveles de metilación en células y tejidos. Incluso es posible comparar los niveles de metilación de diferentes muestras extraídas en las mismas condiciones. Proceso simple: - Fragmentación enzimática o por sonicación del ADN - Interacción con “His-tagged recombinant MBD2b protein”, específica a los fragmentos DNA metilado - Captura de los complejos Proteína/ADN-Methyl mediante Nickel coated magnetic beads. - Purificación y elución. Ventajas: - Protocolo rápido y fácil (4 horas) - Protocolo flexible. Es posible trabajar desde 5 ng hasta 1 µg of DNA - El ADN extraído no sufre ninguna modificación química. - Incluye Control positivo de DNA y primers para la PCR primers, lo cual asegura que todo el proceso se realiza correctamente. |
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