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CondalabTalks
Publicado: 26/01/21 17:04 Categorías: Biología molecular
Los virus pseudotipados son aquellos que expresan en su envuelta proteínas exógenas, esto es, procedentes de otros virus diferentes.
Dado que este tipo de partículas virales no contienen el material genético necesario para producir el resto de proteínas virales, la replicación de las mismas no es viable, por lo que constituyen una muy buena alternativa para estudiar las propiedades y los mecanismos de actuación de virus peligrosos, al disminuir los riesgos asociados a los mismos.
Precisamente por ello, Takara Bio Europe, en su afán de proporcionar los mejores productos para la investigación del nuevo coronavirus SARS-CoV-2, ha adaptado sus conocidos Lenti-X Packaging Single Shots, con el fin de facilitar la producción de partículas lentivirales pseudotipadas con la proteína S, o proteína Spike, del mismo.
Para ello, se ha sustituido el plásmido que codifica para la glicoproteína G del virus de la estomatitis vesicular (VSV-G) por otro plásmido que codifica la proteína de la espícula (S) del SARS-CoV-2.
De este modo, estos lentivirus pseudotipados permiten llevar a cabo los conocidos como ensayos de neutralización cuyo objetivo es determinar la pérdida de capacidad infectiva-para el SARS-CoV-2 disminuyendo, al mismo tiempo, los riesgos potenciales de trabajar con este coronavirus in vivo.
Características principales del producto
Este producto está disponible en dos formatos diferentes, como Packaging Single Shots, que contienen todos los reactivos necesarios para producir las partículas virales pseudotipadas (Packaging Mix y No-envelope Control) o como el Packaging Mix por separado.
Como características principales de este producto podemos destacar:
- Sistema de empaquetamiento de 4ª generación, que permite obtener partículas lentivirales de elevado título viral.
- El packaging mix contiene tanto el mix de plásmidos empaquetadores como el reactivo de transfección en formato liofilizado single shot.
- Diferentes opciones disponibles para distintas variantes de la proteína spike del SARS-CoV-2:
- WT (full length): derivada de la primera secuencia identificada en Wuhan (Wuhan-Hu-1 isolate, NC_045512.2)
- D614G (full length): esta secuencia incluye la mutación D614G, de alta prevalencia y relacionada con una mayor capacidad infectiva del virus.
- WT (truncado) y D614G (truncado): contienen la secuencia codificante truncada, de forma que se produzca la deleción de 19 aminoácidos de la spike en el extremo C-terminal. Esto provoca la eliminación de una señal de retención del retículo endoplasmático, lo que se traduce en una mayor expresión de la proteína en la superficie viral y, en consecuencia, una mayor infectividad.
- Su empleo requiere de instalaciones de bioseguridad de nivel 2, mientras que trabajar con el SARS-CoV-2 in vivo requiere laboratorios de nivel 3.
Protocolo
El formato single shots facilita mucho el protocolo permitiendo, además, minimizar al máximo la manipulación de los reactivos.
- Diluir el vector lentiviral de interés en agua estéril
- Añadir este DNA diluído al packging mix e incubar durante 10 minutos, para permitir que se formen los complejos de nanopartículas.
- Transferir esta mezcla, gota a gota, a las células empaquetadoras, Lenti-X 293T (que deben estar al 80-90% de confluencia).
