3 recomendaciones para tener en cuenta al momento de realizar una PCR

Publicado: 28/08/26 14:05 Categorías: Microbiología

La obtención de resultados fiables de PCR Real Time no depende únicamente de la calidad de los reactivos o del equipo utilizado; una correcta preparación de las muestras y de la reacción es fundamental para garantizar el éxito del ensayo.
Pequeños detalles en etapas como la extracción del ADN, la preparación de la mezcla de reacción o el manejo de las muestras pueden marcar una gran diferencia en la sensibilidad, reproducibilidad y precisión de los resultados.
A continuación, compartimos algunas recomendaciones prácticas que te ayudarán a optimizar tu flujo de trabajo y mejorar el rendimiento de tus análisis.

 

1. Elegir un kit de extracción de ADN adecuado para tu matriz

Este es un paso clave para obtener un ADN de buena calidad y asegurar el correcto funcionamiento del ensayo.

Dependiendo del tipo de matriz —por ejemplo, alimentos con alto contenido de grasas, muestras ambientales, aguas altamente contaminadas— pueden estar presentes diferentes sustancias que interfieran con la amplificación.

La presencia de inhibidores de la polimerasa, como polisacáridos, compuestos fenólicos o sales, puede disminuir la eficiencia de la PCR y provocar resultados débiles, inconsistentes o incluso falsos negativos.

Por ello, es importante seleccionar un kit de extracción que esté específicamente validado o recomendado para la matriz de interés.





2. Preparar un pool de la mix

Al momento de preparar la mix de reacción, recomendamos preparar un pool con el volumen necesario para el total de las muestras que se vayan a analizar, considerando también un pequeño exceso para compensar las pérdidas durante el pipeteo.

La preparación de un pool permite reducir el error de pipeteo, ya que los componentes de la reacción se distribuyen de manera homogénea antes de añadirlos a cada muestra.

Además, ayuda a agilizar el proceso y a mantener condiciones más uniformes entre todas las reacciones.

Es recomendable mantener la mix en las condiciones de temperatura indicadas por el fabricante y evitar exposiciones prolongadas a temperatura ambiente, especialmente cuando se trabaja con enzimas sensibles.

3. Eliminar las burbujas antes de colocar los tubos en el termociclador

Antes de introducir los tubos o la placa en el termociclador, es importante comprobar que no haya burbujas en la mezcla de reacción.

Las burbujas pueden alterar el contacto óptico entre la muestra y el sistema de detección y pueden interferir con la correcta lectura de la señal.

Para evitarlo, una vez preparada la reacción, se recomienda revisar visualmente los tubos y realizar una centrifugación breve para llevar todo el volumen al fondo del tubo y eliminar posibles burbujas.

Este sencillo paso ayuda a mejorar la uniformidad de la lectura de fluorescencia y, por tanto, la reproducibilidad y fiabilidad de los resultados. Si quieres conocer todas las soluciones de Condagene® te invitamos a visitar nuestra web. https://www.condalab.com/int/en/content/93-condagene